（大會開幕式）
01技術(shù)領(lǐng)軍人物擔(dān)任了專題報告主持人
公司技術(shù)領(lǐng)軍人肖君華博士擔(dān)任了“實驗動物新技術(shù)”專題報告的主持人。
02論文獲學(xué)術(shù)交流會一等獎
翼和生物攜手東華大學(xué)課題組報送的《實驗動物大、小鼠病原體快速篩查：樣本預(yù)處理與多重檢測體系的建立與應(yīng)用》論文，榮獲“華東地區(qū)實驗動物科學(xué)學(xué)術(shù)交流會”一等獎。該論文構(gòu)建了一套針對大小鼠病原體的集成化檢測體系：
1）是一種適用于多種類型樣本（包括組織、血液、糞便、墊料等）的通用預(yù)處理方案，實現(xiàn)細菌、真菌、病毒DNA/RNA同步提?。?/p>
2）是符合新國標(biāo)，覆蓋16種病原體（8種必檢病原菌、8種必檢病毒）的多重?zé)晒舛繖z測體系；
3）能解決高背景下非特異擴增難題，為實驗動物健康監(jiān)測提供標(biāo)準(zhǔn)化、高靈敏度的技術(shù)方案。
03翼和生物展位精彩回顧
翼和生物攜實驗動物質(zhì)量控制產(chǎn)品及服務(wù)精彩亮相本次盛會。吸引了大量實驗動物相關(guān)行業(yè)人士的關(guān)注。
04翼和大小鼠質(zhì)量控制相關(guān)產(chǎn)品和服務(wù)
適應(yīng)新國標(biāo)（GB 14922—2022）的要求，翼和公司推出一系列SPF級大小鼠病原體檢測試劑盒，同時也為實驗動物研究機構(gòu)提供全面的技術(shù)培訓(xùn)，助力其建立完整的檢測技術(shù)中心。
通過SNP或者STR檢測，進行大小鼠遺傳質(zhì)量鑒定。
PDX模型(人源腫瘤異種移植模型，PDX)是將患者的腫瘤組織植入免疫缺陷鼠體內(nèi)而建立的人源異種移植模型。這種模型保留了親代腫瘤的組織病理學(xué)、分子特征和藥物反應(yīng)，能夠再現(xiàn)細胞系系統(tǒng)未能捕獲的腫瘤異質(zhì)性，是癌癥機制研究和藥物測試的有用工具，但隨著傳代次數(shù)增加，腫瘤組織保真度下降。翼和生物PDX模型質(zhì)控檢測采用雙色熒光探針，雙標(biāo)準(zhǔn)曲線定量qPCR方法檢測PDX模型中人/小鼠細胞的比例，從而快速、有效判斷PDX模型中小鼠細胞的浸潤狀態(tài)。
翼和生物二十年 砥礪前行 再啟新征程
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一家專注于分子遺傳學(xué)服務(wù)與產(chǎn)品研發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)，獲評“科技型中小企業(yè)”，同時是上海市生物醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心依托單位及上海市遺傳學(xué)會理事單位。公司成立于2005年并深耕行業(yè)二十年，無錫翼和分公司已通過ISO 9001質(zhì)量管理體系認證及CMA資質(zhì)認證，擁有標(biāo)準(zhǔn)化的PCR檢測實驗室和符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的潔凈生產(chǎn)車間，致力于為科研機構(gòu)、生物醫(yī)藥企業(yè)及實驗動物相關(guān)單位提供技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品支持。
本次大會以“衰老科學(xué)交叉前沿（Aging+）”為主題，聚焦衰老和衰老相關(guān)疾病研究的熱點問題與前沿技術(shù)，深入剖析衰老及退行性疾病的演變機制，探索衰老的科學(xué)度量手段，研討衰老的預(yù)警體系與精準(zhǔn)干預(yù)策略，旨在促進衰老領(lǐng)域基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的深度交流與協(xié)作，共同展望本領(lǐng)域的未來發(fā)展趨勢，致力于推動衰老研究的創(chuàng)新發(fā)展，為人類的健康與長壽貢獻新的智慧與力量。
展會現(xiàn)場精彩互動
三天展會期間，翼和生物展位吸引了眾多新老客戶駐足咨詢，現(xiàn)場通過與客戶面對面專業(yè)知識的交流，使得客戶對翼和的服務(wù)和產(chǎn)品有更全面的了解，不少客戶在展會現(xiàn)場表達了合作意向。同時感謝很多新老朋友對翼和生物的關(guān)注與交流，期待下次展會與您再相見!
關(guān)于翼和
Biowing Introduction
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一家專注于分子遺傳學(xué)服務(wù)與產(chǎn)品研發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)，獲評“科技型中小企業(yè)”，同時是上海市生物醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心依托單位及上海市遺傳學(xué)會理事單位。公司成立于2005年并深耕行業(yè)二十年，無錫翼和分公司已通過ISO 9001質(zhì)量管理體系認證及CMA資質(zhì)認證，擁有標(biāo)準(zhǔn)化的PCR檢測實驗室和符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的潔凈生產(chǎn)車間，致力于為科研機構(gòu)、生物醫(yī)藥企業(yè)及實驗動物相關(guān)單位提供技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品支持。
公司核心的項目包括細胞STR鑒定、SPF級大小鼠病原體檢測、端粒長度檢測、基于捕獲測序的SNP檢測（Hi-SNP）、二代靶向重測序（Hi-Reseq）等。客戶群體廣泛，涵蓋了CRO行業(yè)的龍頭企業(yè)以及多所知名高校，包括北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、香港大學(xué)等。未來，公司將繼續(xù)深耕分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，秉承“專業(yè)、協(xié)作、進取”的企業(yè)精神，為推動行業(yè)發(fā)展貢獻力量。
]]>全基因組甲基化研究方法主要有全基因組甲基化芯片、全基因組甲基化重測序(WGBS)和簡化亞硫酸氫鹽測序技術(shù)（RRBS），這些方法其實都有個共同的特點：信息量大，得到差異甲基化區(qū)域（DMR）非常多，但是價格昂貴，對個別區(qū)域覆蓋度和測序深度不足，可能會導(dǎo)致遺漏或假陽性結(jié)果。因此，對這些方法篩選出來DMR，需要做進一步的驗證，在隊列樣本中對目標(biāo)區(qū)域進行甲基化檢測，并分析目標(biāo)區(qū)域與疾病/性狀的關(guān)聯(lián)，才能進一步為疾病與該DMR的關(guān)聯(lián)提供流行病學(xué)的證據(jù)。
Hi-MethylSeq簡介
目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴增子測序（Bisulfite Amplicon Sequencing，BSAS）。在前期全基因組甲基化測序、全基因組甲基化芯片等工作基礎(chǔ)上，或者依據(jù)文獻報道目的基因甲基化與性狀/疾病關(guān)聯(lián)，選擇感興趣的目的區(qū)間或候選基因，利用Hi-MethylSeq技術(shù)對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。
Hi-MethylSeq技術(shù)通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，利用生物信息學(xué)方法，精確定量計算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài)，在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。
優(yōu)勢及應(yīng)用方向
1、優(yōu)勢
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù)，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析，特別適合隊列樣本目標(biāo)區(qū)域的甲基化分析，測序深度高，結(jié)果更加準(zhǔn)確。
2、應(yīng)用
（1）適用于感興趣的目的片段甲基化研究 ；
（2）適用于在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點（DMR）。
3、方向
農(nóng)口：表觀遺傳學(xué)研究、品種鑒定、品種改良
醫(yī)口：tumour早期診斷、表觀遺傳學(xué)生物標(biāo)志物開發(fā)、tumour復(fù)發(fā)的**預(yù)測因子
Hi-MethylSeq關(guān)鍵結(jié)果
結(jié)果對比
與標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果一致，但更有優(yōu)勢
Hi-MethylSeq與BSP結(jié)果一致，而Hi-MethylSeq在研究DNA甲基化時，每一個read 都相當(dāng)于克隆測序時的一個單克隆，每個區(qū)段得到成千上百個reads,所以用二代測序比亞硫酸氫鹽修飾后的克隆測序技術(shù)得到的結(jié)果更加精確。
應(yīng)用案例1
復(fù)發(fā)性妊娠丟失（RPL）是指妊娠24周前連續(xù)兩次或兩次以上的自然流產(chǎn)懷孕，占育齡夫婦的1%。表觀遺傳因素，包括某些基因表達DNA甲基化調(diào)控紊亂可能在RPL中起作用?？蒲腥藛T利用全基因組甲基化重測序和轉(zhuǎn)錄組測序聯(lián)合分析，鑒定蛻膜和血液中DNA甲基化調(diào)控的RPL相關(guān)基因，并使用翼和生物Hi-MethylSeq進行case和control組的關(guān)鍵基因DMR甲基化檢測。終發(fā)現(xiàn)，SGK1和CREB5的異常甲基化可能是神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)的原因之一，這些基因位于子宮內(nèi)膜，可能是導(dǎo)致生殖失敗的原因之一。SGK3在生殖系統(tǒng)中的作用值得進一步調(diào)查。
應(yīng)用案例2
研究人員使用全基因組甲基化芯片聯(lián)合生物信息學(xué)方法來鑒定自身性免疫性疾病GD的差異甲基化區(qū)（DMR），通過構(gòu)建DMR注釋基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）篩選出關(guān)鍵節(jié)點基因（Hub Gene）。利用翼和生物Hi-MetylSeq技術(shù)分析了關(guān)鍵節(jié)點基因的DMR區(qū)域，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CDKN2C、SERPINA1、IRS4，尤其是B3GNT2是潛在的與GD相關(guān)的異常甲基化基因。這些發(fā)現(xiàn)可能是GD疾病中的DNA甲基化的近報道。
綜上所述，全基因組甲基化測序分析獲得DMR后，需要在隊列樣本中進行驗證，翼和Hi-MethylSeq技術(shù)是WGBS后續(xù)驗證的有力工具。
翼和生物
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學(xué)會理事單位，至今已有十六年歷史，專注于為國內(nèi)科研工作者和生物醫(yī)藥企業(yè)提供各類分子遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和質(zhì)控試劑盒。基于自主知識產(chǎn)權(quán)的多重PCR技術(shù)，翼和生物研發(fā)和改良了適用于熒光定量PCR、一代測序和二代高通量測序平臺的多種檢測技術(shù)和產(chǎn)品，逐步形成了在細胞組織和動物模型質(zhì)控、大健康檢測和科學(xué)研究3大板塊產(chǎn)品布局?？蒲屑夹g(shù)服務(wù)產(chǎn)品線，除了自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術(shù)外，翼和還專精SNP基因分型十六年，積累了豐富的經(jīng)驗。2021年成功通過上海市高新技術(shù)企業(yè)認證，并在首席科學(xué)家肖君華教授帶領(lǐng)下，結(jié)合多重長片段PCR和多重巢式PCR技術(shù)，攻克了高同源區(qū)段SNP分型難題，很大程度提高了高同源區(qū)段SNP分型的準(zhǔn)確度。
主要參考文獻：Cai et al. Identifying and validating differentially methylated regions in newly diagnosed patients with Graves’ Disease. DNA and Cell Biology 2021, 40(3):1-9.
Zhou et al. Genome wide methylation analysis to uncover genes related to recurrent pregnancy loss. Genes & Genomics 2021, 43(4):361-369.
]]>??細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原體污染。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之比較好的方法。
2、如果細胞發(fā)生微生物污染時，應(yīng)如何處理?
??直接滅菌后丟棄之。
3、支原體(mycoplasma) 污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀?
??不能。除極有經(jīng)驗之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。
4、支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響?
??支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
5、偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理?
??直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株
]]>??基因測序廣為人知的還有針對唐氏綜合征篩查的無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測。只需要采集孕婦的外周血，通過對血液中游離DNA(包括胎兒游離DNA)進行測序，并將測序結(jié)果進行生物學(xué)分析，從而得出胎兒是否患有染色體數(shù)目異常的疾病，包括常見的21-三體綜合征(唐氏綜合征)、18-三體綜合征(愛德華氏綜合征)和13-三體綜合征(Patau綜合征)。
??近公眾關(guān)注的H7N9，就是中國科學(xué)家通過基因測序等技術(shù)手段，發(fā)現(xiàn)的一種新型重配禽流感病毒。
??近年間，基因測序從實驗室走入臨床，甚至逐漸成為全球醫(yī)學(xué)界熱門的話題。其中一個很重要的原因，是“名人效應(yīng)”，蘋果公司創(chuàng)始人喬布斯和影星安吉麗娜·朱莉都曾采用基因測序方法希望抵御tumour的侵襲，朱莉還為此預(yù)防性地切除自己的乳腺。喬布斯雖然仍因tumour去世，但他生前接受的全基因測序，已成為很多國家富人追捧的體檢服務(wù)。
]]> 2019年新冠肺炎爆發(fā)，從最開始在武漢肆虐，到全世界范圍發(fā)散式多點快速蔓延，迅速打亂了我們平靜的生活。近期著名端粒學(xué)者Maria A Blasco博士與她的團隊發(fā)表了“Shorter telomere lengths in patients with severe COVID-19 disease”的報道，Blasco博士在研究中發(fā)現(xiàn)端粒長度過短引發(fā)的肺部相關(guān)疾病與新冠肺炎的病理相似度極高，并與馬德里一家醫(yī)院展開合作，以五百名新冠患者為研究對象，發(fā)現(xiàn)端粒越短的病患其病情愈嚴(yán)重。據(jù)悉Blasco博士已經(jīng)開始著手研究延長端粒長度的治療方案與手段。若真能因此發(fā)現(xiàn)新冠新的治療方法，有效阻止這一猖狂病魔的橫行霸道，對世界來說無疑是個福音。
端粒長度與端粒酶
端粒是染色體末端一段約3000拷貝的短串聯(lián)重復(fù)序列，端粒長度隨著細胞分裂次數(shù)的增加不斷變短。維持端粒長度的主要機制是通過端粒酶以RNA為模板對重復(fù)序列進行延伸。端粒酶最初在Tetrahymena thermophila 中發(fā)現(xiàn)，在大多數(shù)哺乳動物體內(nèi)充當(dāng)負責(zé)端粒延伸的特異性反轉(zhuǎn)錄酶。端粒酶活性核心組成包括端粒酶RNA模板（TERC）和催化亞基端粒酶RNA逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT），其他還包括一些蛋白復(fù)合物。其中TERC中包含了一個與端?；パa的序列，是端粒DNA重復(fù)序列（TTAGGG）復(fù)制的模板，而TERT負責(zé)端粒的延伸。表達TERT可賦予端粒酶活性，表明TERT的表達是端粒酶活性的限速步驟。因此，hTERC和hTERT又稱為端粒酶的“最小活性單位”。端粒酶調(diào)控的分子機制是多層次的，調(diào)控過程涉及蛋白和RNA合成、加工、端粒酶裝配和亞細胞定位以及端粒酶到端粒的招募中的每一環(huán)節(jié)。端粒酶能把DNA損失的端粒填補起來，使端粒修復(fù)延長，可以讓端粒不會因細胞分裂而有所消耗，保持端粒長度，維持染色體穩(wěn)定性和細胞活性。
端粒長度與衰老、健康
長期以來，端粒長度一直被視作人類衰老和疾病的重要生物標(biāo)志物。在2020年9月11日，Science雜志上一篇 “Determinants of telomere length across human tissues”中指出全血中的端粒長度可代表大部分其他組織中的端粒長度，進一步支持了現(xiàn)有研究中關(guān)于端粒長度、血統(tǒng)及衰老間的聯(lián)系。端粒的長度反映細胞復(fù)制史及復(fù)制潛能，被稱作細胞壽命的“有絲分裂鐘”，即端粒長度的維持是細胞持續(xù)分裂的前提條件。在旺盛分裂或需要保持分裂潛能的細胞，如生殖細胞、干細胞和大多數(shù)癌細胞中，端粒酶被激活，它在端粒末端延長端粒序列，保證這些細胞中端粒長度的穩(wěn)定，維持細胞的持續(xù)分裂功能。據(jù)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，人白細胞端粒長度每年減少20-40bp，人的體細胞每次有絲分裂，若沒有端粒酶的活化作用，便會丟失50-200bp長度的端粒，當(dāng)端粒達到臨界長度時，細胞激活DNA損傷檢查點，開始細胞復(fù)制性衰老或凋亡過程。端粒長度與年齡之間的負相關(guān)性主要歸因于末端復(fù)制問題、氧化損傷和核酸降解。美國科學(xué)家Hayflick發(fā)現(xiàn)細胞一生只能分裂50次左右，而每分裂一次端粒酶便會“磨損”一段，端粒縮短到一定長度就不再能保護染色體，而人體由細胞構(gòu)成，細胞的壽命也具有極限性。
此外，端粒長度還受遺傳、環(huán)境和生活方式等因素的影響，如肥胖、抽煙、打麻將、熬夜刷屏玩手機、缺乏運動和慢性壓力等。目前端粒長度分析已是流行病學(xué)和行為學(xué)研究的新興工具，通過端粒長度檢測可知機體真實衰老程度及衰老速度，可以更加真實體現(xiàn)我們身體的總體健康狀態(tài)，其次，了z再解我們的細胞年齡，我們能更好的了解影響身體衰老的生活方式，并進一步改變生活習(xí)慣，延緩衰老。另外，伴隨著個體化醫(yī)療和基因組學(xué)的發(fā)展，愈來愈多的醫(yī)生考慮將病人的細胞年齡作為治療服務(wù)的考慮因素之一，端粒長度檢測可提供更個性化的醫(yī)療信息，利于醫(yī)生作全面評估。
端粒酶活性與腫瘤
端粒酶通過其逆轉(zhuǎn)錄酶活性復(fù)制和延長端粒DNA，穩(wěn)定染色體端粒DNA的長度，其活性在真核細胞中可檢測到。然而，大多數(shù)人類體細胞并不主動表達這種酶。人體內(nèi)只有生殖干細胞和癌細胞表達足夠水平的端粒酶以完全維持端粒長度（Kim等, 1994）。
腫瘤發(fā)生過程中，端粒酶活性高度上調(diào)，在大多數(shù)癌癥（例如宮頸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等）腫瘤組織中，端粒酶活性較高。這種活性升高的狀態(tài)，使得端粒長度得以維持，即使在癌細胞中端粒長度很短，也能使細胞無限期生長。因此，端粒酶活性是細胞永生的重要先決條件，90%的惡性腫瘤細胞中可檢測到端粒酶活性。
端粒酶活性和端粒酶催化亞基hTERT基因mRNA表達水平是重要的腫瘤分子標(biāo)志物，hTERT基因的mRNA表達水平與端粒酶活性顯著相關(guān)，文獻報道兩種方法的檢測結(jié)論一致（腫瘤和干細胞制品）。但也有文獻報道，hTERT基因mRNA表達法比直接檢測端粒酶活性的TRAP法靈敏度更高！一款臨床肺癌診斷試劑盒是采用hTERT基因表達法，hTERT表達法診斷肺癌的靈敏度高于TRAP法。
鑒于二者與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，端粒酶活性和hTERT基因表達不僅是腫瘤早篩的重要分子標(biāo)志物，而且是干細胞制品成瘤性評估良好的替代性分子標(biāo)志物，與傳統(tǒng)裸鼠試驗、軟瓊脂克隆形成試驗相比，可更加快捷準(zhǔn)確地評估干細胞制品的成瘤性。（關(guān)于端粒酶活性檢查與干細胞成瘤性評估，請見下期精彩內(nèi)容） 翼和生物推出基于雙重qPCR法的人端粒長度檢測試劑盒和端粒酶催化亞基hTERT表達檢測試劑盒（qPCR技術(shù)應(yīng)用于人群隊列樣本端粒長度與疾病/環(huán)境污染研究頂刊速覽；端粒酶與干細胞制劑成瘤性質(zhì)控；細胞端粒酶活性檢測），可應(yīng)用于科研、大健康和工業(yè)用途，歡迎聯(lián)系！電話：021-33559491
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